4-Нитрофенил бета-D-галактопиранозид CAS:200422-18-0

Эффект: ONPG — это субстрат, специально используемый для обнаружения присутствия и активности фермента β-галактозидазы. При наличии и активности фермента β-галактозидазы он расщепляет ONPG на два продукта: о-нитрофенол и производное галактозы. Выделение о-нитрофенола приводит к изменению цвета на желтый, что можно измерить с помощью спектрофотометра.

Применение: ONPG находит широкое применение в исследованиях в области молекулярной биологии и биохимии:

Определение активности β-галактозидазы: ONPG обычно используется для измерения и количественного определения активности фермента β-галактозидазы. Скорость образования о-нитрофенола, которая прямо пропорциональна активности фермента, может быть измерена спектрофотометрически.

Экспрессия и регуляция генов: ONPG часто используется в экспериментах, связанных с изучением экспрессии и регуляции генов. Он часто применяется в анализах слияния белков, таких как широко используемая система слияния lacZ, для изучения экспрессии генов, находящихся под контролем специфических промоторов. Активность бета-галактозидазы, измеренная с помощью ONPG, позволяет получить представление об уровне экспрессии генов.

Скрининг активности β-галактозидазы: ONPG может использоваться в качестве колориметрического метода скрининга в технологии рекомбинантной ДНК для идентификации наличия и функциональности гена LacZ, кодирующего β-галактозидазу. Этот метод скрининга помогает идентифицировать клоны, содержащие интересующий ген.

Исследования кинетики ферментов: ONPG также полезен для изучения кинетики фермента β-галактозидазы. Измеряя скорость реакции фермент-субстрат при различных концентрациях субстрата, можно определить кинетические параметры, такие как константы Михаэлиса-Ментен (Km) и максимальные скорости реакции (Vmax).