Как определить оптимальную концентрацию?
Для индуктора ИПТГ (изопропил-бета-d-тиогалактозид) чем выше концентрация, тем лучше.Оптимальная концентрация зависит от конкретных условий эксперимента и желаемого индукционного эффекта.
Обычно концентрация ИПТГ используется в диапазоне 0,1-1 мМ.Более низкие концентрации могут уменьшить неблагоприятное воздействие на рост клеток и снизить цитотоксичность из-за сверхэкспрессии белков-мишеней.Более высокие концентрации могут вызвать чрезмерную метаболическую нагрузку на клетки, влияя на рост клеток и эффективность экспрессии.
Способом определения оптимальной концентрации может быть оценка уровня экспрессии целевого белка путем проведения тестов индукции IPTG при различных концентрациях.Небольшие культуральные тесты можно проводить с использованием диапазона концентраций IPTG (например, 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ и т. д.), а эффект экспрессии при различных концентрациях можно оценить путем определения уровня экспрессии целевого белка (например, Western блоттинг или флуоресцентное детектирование).По результатам эксперимента в качестве оптимальной концентрации была выбрана концентрация с наилучшим эффектом экспрессии.
Кроме того, вы также можете обратиться к соответствующей литературе или опыту других лабораторий, чтобы понять обычно используемый диапазон концентраций IPTG в аналогичных экспериментальных условиях, а затем оптимизировать и отрегулировать их в соответствии с экспериментальными потребностями.
Важно отметить, что оптимальная концентрация может варьироваться в зависимости от различных систем экспрессии, целевых белков и условий эксперимента, поэтому лучше всего оптимизировать ее в каждом конкретном случае.
Время публикации: 28 сентября 2023 г.